电泳:它是什么,它的用途是什么以及如何完成
内容
电泳是一种实验室技术,目的是根据分子的大小和电荷分离分子,从而可以进行疾病诊断,蛋白质表达验证或微生物鉴定。
电泳是一种简单且低成本的方法,用于实验室常规和研究项目中。根据电泳的目的,可能有必要进行其他测试和检查,例如以进行诊断。
有什么用
由于电泳是一种简单且低成本的技术,因此可以在研究项目和诊断中出于不同目的进行电泳。因此,可以进行电泳以:
- 识别病毒,真菌,细菌和寄生虫,这种应用在研究项目中更为常见;
- 亲子鉴定;
- 检查蛋白质的表达;
- 识别突变,例如对白血病的诊断有用;
- 分析循环血红蛋白的类型,有助于镰状细胞性贫血的诊断;
- 评估血液中存在的蛋白质量。
根据电泳的目的,可能有必要对医生进行其他补充检查以完成诊断。
怎么做
为了进行电泳,需要凝胶,根据目的,凝胶可以是聚丙烯酰胺或琼脂糖,电泳缓冲液和还原剂,分子量标记和荧光染料,以及UV或LED照明设备(也称为透照器)。
制备凝胶后,必须放置一个特定的物体,以便在凝胶(通常称为梳子)中制成孔,并使凝胶凝固。准备好凝胶后,只需将物质涂抹到孔中即可。为此,必须在其中一个孔中放置分子量标记,一个是阳性对照(该物质是已知物质),一个是阴性对照,它可以确保反应的有效性,以及要分析的样品。所有样品都必须与荧光染料混合,这样可以可视化透射照明器上的条带。
必须将带有样品的凝胶放入装有特定缓冲液的电泳槽中,然后打开设备,以使存在电流,因此存在电势差,这对于根据其分离颗粒而言很重要负载和大小。电泳运行时间根据程序的目的而有所不同,可以持续长达1小时。
在指定的时间之后,可以查看通过透射照明器的电泳结果。将凝胶置于UV或LED光线下时,可以看到条带图案:分子越大,其迁移越小,越靠近孔,而分子越轻,迁移势就越大。
为了使反应得到验证,必须将阳性对照的条带可视化,在阴性对照中什么也不能可视化,否则表明存在污染,必须重复整个过程。
电泳类型
可以出于不同目的进行电泳,并且根据其目的,可以使用几种类型的凝胶,最常见的是聚丙烯酰胺和琼脂糖。
电泳鉴定微生物在研究实验室中更为普遍,但是,出于诊断目的,电泳可以用于鉴定血液学疾病和随蛋白质数量增加而演变的疾病,这是电泳的主要类型:
1.血红蛋白电泳
血红蛋白电泳是一项实验室技术,用于鉴定血液中循环的不同类型的血红蛋白,从而有可能鉴定与血红蛋白合成有关的疾病。血红蛋白的类型可通过在特定pH值(理想情况下介于8.0和9.0之间)进行电泳来鉴定,其谱带可与正常谱带进行比较,从而鉴定出异常的血红蛋白。
它的用途是: 进行血红蛋白电泳以调查和诊断与血红蛋白合成相关的疾病,例如镰状细胞性贫血和血红蛋白C疾病,此外还有助于区分地中海贫血。了解如何解释血红蛋白电泳。
2.蛋白质电泳
蛋白质电泳是医生要求的检查,目的是评估血液中循环的蛋白质量,从而确定疾病。该检查是从血液样本中进行的,将其离心以获得血浆,血液的一部分包括蛋白质。
电泳后,可以看到条带的图案,随后可以看到表示蛋白质各部分数量的图表,这对诊断至关重要。
它的用途是: 通过蛋白质电泳,医生可以根据带状图谱和检查报告中显示的图表来调查多发性骨髓瘤,脱水,肝硬化,炎症,肝病,胰腺炎,狼疮和高血压的发生。
了解它是如何完成的,以及如何理解蛋白质电泳的结果。